中国实验诊断学  2007年7月  第11卷  第7期  884-886

文章编号：1007-4287（2007）07-0884-03

血清中葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的诊断意义

赵冠飞， 李永哲， 王红梅， 佟大伟， 张蜀澜， 胡朝军

（中国医学科学院 中国协和医科大学 北京协和医院 检验科， 北京 100730）

摘要：目的  探讨血清中葡萄糖6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase, GPI）抗原升高在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者诊断中的意义。方法  用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测128例RA患者，86例其他风湿病患者和42例健康对照血清中GPI抗原的浓度，RA患者同时还检测了类风湿因子（RF）,关节疼痛及肿胀数，血沉（ESR），以及X线分级等。结果  128例RA患者血清中GPI浓度为（2.52±2.37）ug/ml，86例其他风湿性疾病组为（0.083±0.056）ug/ml ，42例健康对照组为（0.081±0.050）ug/ml，RA患者血清中GPI浓度显著高于其他风湿病组和健康对照组（P<0.05），在RA活动组和RA非活动组，亦有显著差异（P<0.05）。通过分段回归分析发现GPI的浓度和RA病情活动成正相关。GPI抗原对RA检测的敏感性为43.5%，特异性为98.3%。结论  GPI在部分RA患者血清中显著升高，有可能成为诊断RA及判断其疾病活动性的一个新指标。

关键词：葡萄糖6-磷酸异构酶；关节炎；类风湿；酶联免疫吸附试验

中国分类号：R593.22          文献标识码：A

英文摘要(略)

(Chin J Lab Diagn, 2007, 11:884)

类风湿关节炎是一种常见的，多关节受累的，致残率高的自身免疫性疾病。以往的检测指标类风湿因子（RF）虽然临床应用广泛，但特异性较差。随着人们对RA抗体谱的深入认识，抗环胍氨酸肽（CCP）抗体，已使RA检测的敏感性和特异性有所提高，但RA患者体内存在多种自身抗体和很多其他生化异常，候选抗原还有II型胶原、热休克蛋白60、角蛋白和软骨糖蛋白39等，近来有文献^[1]报道抗葡萄糖6-磷酸异构酶抗体与RA相关，后来的一些研究认为抗GPI抗体并不是RA的特异性抗体，我们检索大量相关资料，发现GPI抗原本身具有多种生物功能，本研究通过对血清GPI浓度的检测，探讨GPI能否成为RA的下个新的诊断指标。

1  资料和方法

1.1  研究对象及RA患者活动性判断标准

214例来自北京协和医院门诊或住院患者，其中RA患者128例，包括活动期70例，非活动期58例，其中男性26例，女性102例，年龄19-58岁，平均年龄（44±16）岁。对照组86例其他风湿病患者，包括骨性关节炎（OA）16例，强直性脊柱炎（AS）24例，干燥综合征（SS）10例，系统性红斑狼疮（SLE）20例，原发性胆汁性肝硬化16例，其中男性26例，女性60例，年龄22-53岁，平均年龄（40±11）岁。所有患者均符合1987年美国风湿病协会（ACR）诊断标准。另外42例健康体检者，其中男性22例，女性20例，年龄29-76岁，平均（48±12）岁。

RA患者活动性判断标准①3个或3个以上关节肿；②每日>45min的晨僵；③血沉（ESR，魏氏法）>128mm/1h；④3个或3个以上的关节压痛；⑤双手平均握力（每只手各测3次，将单手最高值相加除以2为所得值）男性≤192mm Hg，女性≤146mm Hg。判断活动期患者的标准为满足以上5项指标中的3项或3项以上者，不能满足其中的3项或3项以上者，被认为不活动或活动度较低。

1.2方法

采用酶联免疫吸附试验（ELISA）来检测人血清GPI浓度（该试剂盒和GPI抗原标准品均由上海北加生化试剂有限公司提供）。测定步骤：基本测定参数：酶标检测仪，吸光度测定精密0.0-2.0A加减0.001A。主波长492nm，副波长630nm。以GPI参考标准0微克/毫升校零，测定空白孔1孔，其余各孔加入血清样品，每孔100微升，37度，1小时，取出用洗涤液洗涤5次，拍干；除空白孔外，其余各孔加酶标记抗体100微升，37度，1小时，取出用洗涤液洗涤5次，拍干；将显色缓冲液倒入显色剂瓶内，充分摇动不少于10分钟，待其完全溶解；各孔加底物显色液100微升，室温避光15分钟；各孔加终止液50微升。结果判断采用酶标仪，主波长492nm，副波长630nm，以GPI参考标准品0微克/毫升校零，测定各孔吸光度值；以GPI参考标准品标示值为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。以待检各孔的吸光度值查标准曲线得出相应的检测结果。参考之范围：0.16微克/毫升以下正常； 0.16-0.33微克/毫升可疑；0.33微克/毫升以上阳性。

1.3  统计学处理

采用SPSS11.0软件进行统计分析，组间样本的比较采用X²检验。所有假设检验的假设水准定为a=0.05。组间数据结果进行Spearman等级相关分析。

2  结果

2.1  各组GPI浓度  RA患者血清中GPI浓度为（2.52±2.37）ug/ml，其他风湿病组为（0.083±0.056）ug/ml，健康对照组为（0.081±0.050）ug/ml，RA患者血清中GPI浓度显著高于其他风湿病组和健康对照组（P<0.05），在RA活动组和RA非活动组，亦有显著差异（P<0.05）。见表1。

2.2  GPI与RA其他临床检验指标相关性分析 

通过Spearman等级相关分析发现GPI的浓度和RA肿胀、疼痛关节数成正相关。见表2。

3讨论

GPI又称为D-葡萄糖6-磷酸酮异构酶（D-glucose-6-phosphate ketol-isomerase），最早在1968年因非球形红细胞溶血性贫血而得到认识，是糖酵解和糖异生的重要酶类，它除了具有酶活性之外还有细胞因子及生长因子活性，可诱导髓样干细胞向单核细胞及B细胞向浆细胞的分化。1986年，Gumey等^[2]在小鼠体内发现相对质量56000的神经白介质素（Neurorenvin, NLK）能使体外培养的胚胎脊柱神经元存活。1988年又发现GPI与NLK有90%的同源性，将NLK的DNA转染到猴的COS细胞内，表达的产物显示出GPI的酶活性。YU等^[3]在肿瘤细胞内发现GPI可以调节基质金属蛋白酶3（matrix melauoproleinase-3, MMP-3）,而MMP-3在RA病人的滑膜细胞和血管内皮细胞中有高表达，有明显促进骨破坏的作用，能促进淋巴细胞的增殖，由此研究人员推测GPI的细胞因子及生长因子活性可能对RA病人的血管增生滑膜增殖，骨破坏起了重要作用，同时增加了RA的易感性。

GPI作为一种广泛表达的抗原，在T细胞受体转基因小鼠模型（K/BxN）中，诱导小鼠关节炎的发生，持续产生抗GPI抗体，与人类RA相似。有文献^[1]报道在RA病人的血清和关节液中检测到了高水平的抗GPI抗体（64%），而Lyme病相关的关节炎、干燥综合征（SS）和正常人群则很少（3%），并认为该抗体与RF无相关性。此外，还在RA病人的血清和关节液中发现高浓度的GPI及其免疫复合物，通过共聚焦显微镜和免疫组化发现RA病人肥大滑膜或滑膜绒毛的动脉和毛细血管有高密度的GPI表达，可能是由血管内皮生长因子（VEGF）所引起。认为GPI是通过内皮细胞或滑膜液中的可溶性蛋白递呈给免疫系统，并认为抗GPI抗体在RA的病理过程中起作用。但随后的一些研究认为抗GPI抗体并不是RA特异性抗体，该抗体在RA病人中的阳性率很低。Jouen F等[4]通过酶联免疫吸附试验测得抗GPI抗体在RA病人和健康对照组的阳性率分别为45.4%和2.5%，而在SLE、PM、AS、SS、PSS中的阳性率分别为53%、45.4%、44%、42.8%、5.8%。并认为抗GPI抗体并非RA特异性抗体，无法鉴别RA及其它风湿病患者，对于RA诊断及预后没有价值。Matsumoto等^[5]在不同RA病人组测得的抗GPI抗体阳性率平均只有15%。而Herve等^[6]在RA病人没有检测到抗GPI抗体，由此认为，抗GPI抗体本身可能并不是RA标志性抗体。

Schepp^[8]研究发现血清及关节液中明显增高的GPI抗原本身可能与RA相关。本文通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中GPI浓度，从而进一步了解GPI抗原在RA发病中的作用及其对RA的临床诊断价值。本研究发现RA患者组的GPI含量显著高于其它风湿病组及健康对照组（P<0.05），而RA活动组和RA非活动组也有显著差异（P<0.05）,GPI高浓度的RA患者阳性率为45%，显著高于其他风湿病级信健康对照组，并发现GPI浓度和RA疼痛和肿胀关节数及RF呈正相关。RA作为一种免疫功能紊乱所引起的自身免疫性疾病，患者体内存在多种自身抗原和自身抗体，不同患者的自身抗原可能不同。有研究[9]分别对抗GPI抗体阳性和阴性的RA患者及正常人进行了GPI-DNA序列分析，发现抗GPI抗体阳性的个体中，GPI异构体的数量显著高于抗GPI抗体阴性个体，GPI异构体的存在可能刺激机体自身抗体的产生，参与了RA的发生发展过程，GPI同时作为一种自身抗原与GPI自身抗体相结合，形成免疫复合物可引起关节炎症的进一步加重^[10]。GPI在部分RA病人中的高表达有一定特异性，而且和关节的炎症状态有一定相关性，GPI对RA诊断及活动性的判断有很大的临床应用价值，或者和CCP一样成为RA活动的指标之一，从而增强RA诊断的敏感性和可靠性，有希望广泛应用于RA的诊断及活动性的判断，但需要进一步扩大样本和疾病的检测范围。

参考文献：略

（收稿日期：2007-01-23）

遗漏之处敬请原谅