文章编号：1007-4287（2006）11-1292-02
检测抗环瓜氨酸酸抗体和葡萄糖6-磷酸异构酶
对类风湿关节炎诊断意义的比较
陈琳1，王晓红2，姜国平1，李慧颖1，吕英春1，樊智清2，陈晶2
（1.吉林省人民医院 风湿免疫科，吉林 长春130021；2.吉林省人民医院 检验科）
摘要：目的 探讨葡萄糖6-磷酸异构酶（GPI）在类风湿关节炎中的诊断意义。方法 应用ELISA方法检测血清中的GPI和抗CCP抗体。结果 ①60例RA患者血清GPI平均浓度为（0.97±1.6）ug/ml，57例非RA病人的GPI平均浓度为（0.52±0.95）ug/ml；RA组抗环瓜氨酸（抗CCP）抗体平均浓度是（11.87±124.8）U/ml，非RA组抗CCP平均浓度为（3.36±10.7）U/ml，均有显著差异；②敏感性：GPI为90%，抗CCP为90%；特异性：GPI为85%，抗CCP为90%，均无显著差异；③通过回归分析发现关节肿胀、疼痛与GPI浓度相关。结论 GPI可能同抗CCP一样成为诊断RA及判断疾病活动性的一个新指标。
关键词：类风湿关节炎；葡萄糖6-磷酸异构酶；抗环瓜氨酸抗体
中图分类号：R593.22 文献标识码：A
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）的诊断目前采用1987年美国风湿病学会（ARA）修订的RA分类标准，其中唯一的实验室指标是类风湿因子（rheumatoid factor, RF），其特异性不理想。近年来发现RA患者中存在多种自身抗体，其中抗环瓜氨酸抗体（cycliccitrullinated peptide, CCP）和葡萄糖6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase, GPI）抗体受到较多的关注。本研究对抗CCP和GPI在RA中的诊断意义做了初步的临床比较。
1 资料与方法
1.1 临床资料 117例均来自吉林省人民医院门诊或住院病人，其中RA病人60例，包括女性47例，男性13例，年龄15-73岁，平均年龄（48±10）岁，对照组57例非RA病人的风湿病人，其中男性14例，女性43例，年龄17-81岁，平均年龄（49±12）岁。所有病人均符合美国风湿病学会（ACR）修订的诊断分类标准。
1.2 GPI检测 试剂盒和标准品均为上海北加生化试剂公司提供。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测病人血清中的GPI。试验步骤按照说明书，病人血清加入样品液中，检测时加阳性对照、阴性对照和GPI标准品（0、0.16、0.33、1.0、2.0ug/ml）各100ul，37℃ 1h，弃样本后磷酸盐缓冲液（PBS）洗板3次，再加入酶标记抗体GPI抗体，37℃ 1h，再次PBS洗板3次，加入邻苯二胺（OPD）显色液100ul显色10min后，2mol/L硫酸50ul终止显色，酶标仪（Bio-Rad550）490nm读板，参比波长630nm。
1.3 抗CCP抗体检测 应用ELISA法，试剂盒购自德国欧蒙公司。
1.4 结果判定 GPI实验结果根据标准品的浓度和吸光度作直线回归，浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，以待测各孔的吸光度值查标准曲线得出相应的检测结果。GPI的浓度临界值为0.32ug/ml。抗CCP抗体>5U/ml被认为阳性。
1.5 统计学处理 计算资料采用t检验，计数资料采用X2检验，对RA患者的年龄、性别、关节肿痛数、抗CCP抗体检测等数据采用Logistic回归分析。
2 结果
2.1 两组GPI与抗CCP抗体浓度 RA病人血清GPI平均浓度为（0.97±1.6）ug/ml，非RA病人的GPI平均浓度为（0.52±0.95）ug/ml，两组间存在显著性差异（P=0.032）；RA病人血清抗CCP抗体平均为（11.87±124.8）U/ml，非RA病人的平均抗CCP为（3.36±10.7）U/ml，两组间存在显著性差异P<0.01，见表1。
|
表1 RA组与非RA组GPI与抗CCP浓度 |
|
|
GPI（ug/ml） |
抗CCP（U/ml） |
|
RA组 |
0.97±1.6 |
11.87±124.8 |
|
非RA组 |
0.52±0.95 |
3.36±10.7 |
|
P值 |
<0.05 |
<0.01 |
2.2 两组敏感性与特异性的测定 在RA病人组中，GPI阳性患者55例，阴性患者5例，非RA病人组，GPI阳性患者10例，阴性患者47例，敏感性90%，特异性85%；RA病人组中，抗CCP抗体阳性患者56例，阴性患者4例，非RA病人组，抗CCP抗体阳性患者5例，抗CCP抗体阴性患者52例，敏感性90%，特异性905。见表2。
|
表2 RA组GPI与抗CCP敏感性与特异性比较 |
|
|
GPI |
抗CCP |
|
敏感性 |
90% |
90% |
|
特异性 |
85% |
90% |
2.3 对RA患者检查数据进行Logistic回归结果 通过对RA患者GPI进行Logistic回归分析发现关节肿胀、疼痛与GPI浓度相关，与年龄、性别、抗CCP抗体无关。
|
表4 对26例病人的GPI进行 |
|
|
年龄 |
性别 |
疼痛数 |
肿胀数 |
抗CCP |
|
|
岁 |
男 |
女 |
（个） |
（个） |
阳性率（%） |
|
RA |
48±10 |
13 |
47 |
7±4 |
8±6 |
90 |
|
P值 |
>0.05 |
>0.05 |
<0.01 |
<0.01 |
>0.05 |
3 讨论
文献证实环瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白（filaggrin）相关抗体的主要抗原决定族，这些抗体对RA的诊断具有高度特异性，并可在RA的早期出现。2000年CCP的人工合成使抗CCP检测在临床广泛应用成为可能。文献表明抗CCP抗体的检测在RA的诊断、鉴别诊断、发病早期意义以及预后均具有重要的临床意义。文献报道[1]在RA病人的关节液和血清中发现高浓度的GPI及其免疫复合物，并且通过聚集显微镜和免疫组织化学发现RA病人肥大滑膜、滑膜绒毛的小动脉、毛细血管有高密度的GPI表达。Schaller[1]等认为GPI是通过内皮细胞或者滑膜液中的可溶性蛋白递呈给免疫系统，并认为GPI抗体在RA的病理过程中起重要作用，但最近一些学者[2，3]发现GPI抗体并非RA的特异性抗体，并且在RA中的表达阳性率低，在非RA病人中，甚至没有表达。
RA病人的关节液和血清中发现高浓度的GPI是否对诊断RA、判断RA疾病的活动情况有帮助。本研究发现RA病人组较非RA病人组GPI明显增高，差异有统计学意义。通过Logistic回归发现GPI与关节肿胀、疼痛数呈正相关，并且独立于抗CCP，这说明GPI在部分RA患者中升高具有一定的特异性，并且和关节的炎症状态有一定的相关性。并且我们发现有3例患者有较高的GPI浓度，而抗CCP浓度正常，患者并且可疑RA，因而有待监测患者是否发展为RA，以及GPI是否较抗CCP有更早提示RA的作用。
抗CCP抗体在RA诊断中有较高的特异性与敏感性已经被大多数学者所接受，本研究显示GPI与抗CCP比较有相同的敏感性，较低的特异性，但两者均无统计学差异，结合Logistic回归分析GPI与抗CCP无相关性，因而有理由相信GPI有可能成为同抗CCP一样的RA的一种新的标志物，但还需要进一步扩大样本和疾病的检测范围。对于GPI的特异性较低有待于进一步改进试验方法。
参考文献（略）
（收稿日期：2006-09-20）
