第十二届全国风湿病学学术会议论文集选

葡萄糖6-磷酸异构酶mRNA在类风湿关节炎

患者外周血单个核细胞中的表达及意义

葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）最早在1968年因非球形红细胞溶血性贫血而得到认识，是糖酵解和糖异生的重要酶类，它除了具有酶活性之外还有细胞因子及生长因子活性。GPI作为一种泛在表达的抗原，在T细胞受体转基因小鼠模型（K/BxN）中，可诱导小鼠关节炎的发生，并持续产生抗GPI抗体，但最近有文献报道该抗体本身可能并不是类风湿关节炎（RA）的标记性抗体。本文通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测外周血单个核细胞（PBMC）中GPI mRNA的表达情况。探讨葡萄糖-6磷酸异构酶mRNA在患者外周血单个核细胞中的表达及其与RA疾病活动性的关系。对30例RA活动期患者，30例缓解期患者，30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用RT-PCR半定量检测PBMCs中GPI mRNA的表达水平。RA活动期患者GPI mRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者和其他风湿性疾病患者（P<0.05），在RA活动组和RA非活动组，差异亦有统计学意义（P<0.05）。GPI mRNA在部分RA患者中高表达可能在RA发病机制中起作用，并与疾病的活动性有关。

基金项目：国家自然科学基金资助项目（30471617）

通讯作者：李永哲，Email：yongzhelipumch@yahoo.com.cn

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞GPI mRNA

及其血清中GPI抗原表达水平的研究

2002年 Schubert等报道抗葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）抗体和类风湿关节炎（RA）相关，RA患者关节液和血浆存在高滴度GPI抗体和可溶性GPI分子，后来相继有报道显示抗GPI抗体并不是RA的特异性抗体，但RA患者关节液及血清中GPI抗原可能对RA诊断的敏感性及特异性有所帮助，本文通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测外周血单个核细胞（PBMCs）GPI mRNA及血清中GPI抗原的表达情况，探讨葡萄糖-6磷酸异构酶mRNA在RA患者PBMCs中的表达情况及其在RA患者血清中表达水平与RA疾病活动性的关系。对30例RA活动期患者，30例RA缓解期患者，30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用RT-PCR半定量检测PBMCs中GPI mRNA的表达水平，采用ELISA法检测其血清中GPI抗原的表达水平。①RA活动期患者GPI mRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者和其他风湿性疾病患者（P<0.05），在RA活动组和RA缓解组，差异亦有统计学意义（P<0.05）。②RA活动期患者血清中GPI抗原的表达水平明显高于RA缓解期患者和其他风湿性疾病患者（P<0.05）。在RA活动组和RA缓解组，差异也有统计学意义（P<0.05）。RA患者外周血GPI mRNA及血清中GPI抗原的异常表达，可能参与RA疾病的发生发展，并与疾病的活动性密切相关。

基金项目：国家自然科学基金资助项目（30471617，30640084）

通讯作者：李永哲，Email：yongzhelipumch@yahoo.com.cn

血清葡萄糖-6-磷酸异构酶测定在类风湿关节炎的临床意义

北京大学人民医院（100044）卢靓  孙晓云  栗占国

葡萄糖6-磷酸异构酶（GPI）存在于各种细胞胞质内，是糖酵解和糖异生的重要酶类，可作为一种细胞因子或生长因子分泌于细胞外。在T细胞受体转基因小鼠模型（K/BxN）中，GPI可作为B细胞和T细胞的自身抗原，使试验小鼠产生炎性关节炎的症状。同时，给正常小鼠注射抗GPI抗体，可使小鼠发生关节炎症，其特征与人类风湿关节炎（RA）相类似。本文主要探讨血清中GPI抗原升高在RA患者诊断中的意义及其与RA疾病活动性的关系。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）原理检测人血清中GPI浓度（该试剂盒和GPI抗原标准品均由上海北加生化试剂有限公司提供）。共检测122例RA患者，127例其他风湿性疾病和73名健康献血者血清中GPI浓度。在RA患者，还同时检测了类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸多肽抗体和红细胞沉降率（ESR）等指标。结果：①以GPI浓度≥0.20mg/L为阳性时，GPI在RA的阳性率为78.7%，显著高于骨关节炎（OA）（10%）、强直性脊柱炎（AS）（14.7%）、干燥综合症（SS）（45%）、系统性红斑狼疮（SLE）（18.8%）、银屑病关节炎（PsA）（18.2%）患者和正常人（9.6%），P<0.01。②GPI浓度在RA中的平均浓度为了2.55mg/L，显著高于OA（0.14mg/L）、AS（0.21mg/L）、SS（0.75mg/L）、SLE（0.34mg/L）、PsA（0.26mg/L）和正常对照（0.33mg/L），GPI在RA组中的浓度显著高于其他风湿性疾病和正常对照组。③GPI对于诊断RA的敏感性为78.7%，特异性为86.6%。④同时122例RA患者中，晨僵≥1h共84例，其中GPI阳性71例（84.5%），而GPI阴性为13例（15.5%）；122例RA患者中，关节肿胀数目≥6个关节共105例，其中GPI阳性90例（85.7%），而GPI阴性仅有15例（14.3%）。因此，GPI阳性患者晨僵时间及关节肿胀数目高于GPI阴性患者。差异有统计学意义。GPI在多数RA患者血清中升高有可能作为诊断RA及判断RA活动性的指标之一。

葡萄糖-6-磷酸异构酶在类风湿关节炎诊断中的应用

复旦大学附属华山医院（200040）  邹和建

葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）在体内催化6-磷酸葡萄糖向6-磷酸果糖转化，是糖酵解和糖异生过程中的重要酶类，普遍存在于细胞质内。研究发现GPI并可作为细胞因子或生长因子分泌于细胞外，诱导髓样干细胞向单核细胞及B细胞向浆细胞的分化。既往认为，GPI在类风湿关节炎（RA）患者中阳性率较低，但后来越来越多的研究否定了这一结论。Cha等在RA患者血清和关节液中检测出高滴度的抗GPI抗体；Kassahn等在RA患者的血清和关节液中发现高水平GPI和GPI免疫复合物，通过激光共聚焦显微镜和免疫组织化学发现RA患者的小动脉及毛细血管有高密度的GPI表达，认为与血管内皮生长因子有关，GPI免疫复合物可通过Fc受体介导替代途径激活补体诱发或加重关节炎症。从GPI的产生和功能上看，GPI并非RA所特有，但越来越多的研究提示，其在RA的发病以及病情发展中发挥着一定的作用。抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）在RA诊断中的价值已经得到公认。研究发现RA患者中GPI与抗CCP抗体有较强的相关性。本研究小组采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法分别测定RA 112例、非RA其他风湿病患者45例以及健康志愿者119名血清中的抗CCP抗体，GPI抗原和IgM-RF，应用ROC曲线比较抗CCP抗体和GPI抗原对RA的诊断价值，结果发现：在诊断RA时，抗CCP抗体和GPI抗原的ROC曲线下面积均>IgM-RF，三者曲线下面积分别为0.967、0.872、0.814。抗CCP抗体、GPI抗原与IgM-RF显著相关，GPI与抗CCP抗体间也存在显著相关（r=0.605，P<0.01）。从ROC曲线分析得知：抗CCP抗体ROC曲线下面积>GPI，且两者间差异有统计学意义，提示在RA诊断中，抗CCP抗体测定价值>GPI。以3.531U/ml为抗CCP抗体最佳临界值时，其灵敏度为0.863，特异度为0.921；以1.02ug/ml为GPI最佳临界值时，其灵敏度为0.845，特异性为0.913。但是当采用抗CCP抗体与GPI的联合试验时，RA诊断的灵敏度达到0.946，特异度这0.853；当采用序贯试验时，灵敏度为0.838，特异度为1。因此采用序贯试验可以增加RA诊断的特异度，采用联合试验，可以增加RA诊断的灵敏度。HLA-DR4与RA的相关性已经得到公认，本研究对77例RA患者HLA-DR4与GPI相关性研究未发现两者之间有显著相关。初步研究发现，RA活动组GPI显著高于非活动组，GPI浓度与RA病情活动呈正相关。但是这一结论是基于横断面的研究，对RA患者GPI水平进行前瞻性研究随访才能真正揭示GPI与RA病情活动的相关性。

葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎诊断中的意义

河北省人民医院（050051）

张风肖  陈伟华  陶杰梅  郑桂敏  宁晓然  孙丽君  李  芳  于织波  闫永龙

探讨血清中葡萄糖6-磷酸异构酶（GPI）在类风湿关节炎（RA）诊断中的意义。用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体加心法检测血清和关节液中GPI抗原的浓度。对RA患者同时还检测了类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（ACCP）、抗角蛋白抗体（AKA）、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、血小板（PLT）的浓度。52例活动期RA患者血清中GPI浓度为（17±29）mg/L，2例完全缓解期RA患者血清中GPI浓度为（0.17±0.04）mg/L，3例RA患者关节液中GPI浓度为（10±7）mg/L[该3例患者血清中GPI浓度为（4.8±0.8）mg/L]，27例其他风湿病组患者血清中GPI浓度为（1.1±1.8）mg/L，10名献血员血清中GPI浓度为（1.6±2.4）mg/L。RA患者血清中GPI浓度显著高于其他风湿病组和献血员组（P<0.01），在RA活动组和RA非活动组患者血清中GPI浓度差异也统计学意义（P<0.05），RA患者关节液中GPI浓度高于其自身血清中GPI浓度。通过分段回归分析显示RA患者血清中GPI的浓度和RA病情活动呈正相关。GPI抗原对RA检测的敏感性为82.7%（43/52），特异性为83.8%(31/37)。GPI抗原在活动期RA患者血清和关节液中显著升高，GPI抗原检测有可能成为诊断及判断RA病情活动性的一个新指标。