脂蛋白残粒(RLP)——致动脉粥样硬化新的脂质指标

人类动脉粥样硬化的形成，临床研究中一直将甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）作为危险因素。然而近期众多报导提示，富含TG的脂蛋白（triglyceride-rich lipoproteins,TRL）残粒，在致动脉粥样硬化（AS）过程中起重要作用。是致AS脂蛋白谱中又发现了一种物质，空腹脂蛋白残粒的水平对冠状动脉性疾病（CAD）危险评价优于TG指标。尤其在II-型糖尿病、III型高脂血症、血液或腹膜透析终末期肾病，脂蛋白残粒水平显著变化，对预测CAD的发生，有较高的临床意义。

一、富含TG脂蛋白残粒形成、种类

人体中富含TG的脂蛋白有乳糜微粒（CM）和极低密度脂蛋白（VLDL），前者来源于小肠，后者由肝脏合成分泌，经脂蛋白脂酶（LPL）作用，两者水解去除了大量TG磷脂、载脂蛋白A（ApoA）和载脂蛋白C（Apoc）后，转变为含胆固醇、胆固醇酯和载脂蛋白E（ApoE）的小而密颗粒，这就是富含TG的脂蛋白残粒（TRL）。

TRL包含一组不同来源，不同代谢阶段的脂蛋白颗粒。其颗粒大小、密度、电泳迁移率、化学组成及被受体识别方面都不相同。

VLDL经过水解，产生一组小分子、高密度的富含胆固醇酯的脂蛋白残粒，一般认为脂蛋白残粒密度在1.006-1.019kg/L或Sf（Svedberg flotation）20-60单位和Sf60-400单位两种。CM经过水解后产生的残粒大小与密度都比VLDL Sf60-400单位残粒大。中间密度脂蛋白残粒Sf12-20单位。

CM脂蛋白残粒和大颗粒VLDL脂蛋白残粒（Sf60-400单位）都不能进入动脉血管内膜，而小颗粒VLDL脂蛋白残粒（Sf20-60单位）的IDL脂蛋白残粒（Sf12-20单位），由于能进入动脉血管内膜，被证明与AS的严重程度与进展高度相关。因此，用Sf在20-60单位的脂蛋白残粒来反映残余状态较Sf在12-20单位的脂蛋白残粒更好。因为既包含了密度在1.006-1.019kg/L脂蛋白残粒，也包含密度<1.006kg/L更小的脂蛋白残粒。

二、脂蛋白残粒的免疫沉淀分离测定法（RLP-C）

已申请发明专利  申请号：200610023924.9

TRL残粒是一组在颗粒大小、密度、电泳迁移率、化学组成及受体识别等方面呈高度异质性的颗粒。以前的方法是根据不同的物理和化学性质来测定脂蛋白残粒。

脂蛋白分离的参考方法是超速离心法（UC），但技术要求高，仪器设备特殊，工作量巨大，实验代价昂贵，很难在常规测定中开展。

聚丙烯酰胺凝电泳（PAGE）法和琼脂糖电泳法，可用TRL颗粒分子大小的慢迁移率来分离脂蛋白残粒。虽然设备和技术要求没有UC高，但在测定低浓度的脂蛋白残粒及其浓度些微的变化，灵敏度欠佳，并有电泳条带在中间密度脂蛋白区域中掺杂有Lp（a）而带来误差。我们研究开发的免疫沉淀分离法是一种基于脂蛋白残粒表面的载脂蛋白组成不同而建立的方法。

首先制备免疫亲和胶的前处理液。将抗人ApoB-100单克隆抗体和抗ApoAI单克隆抗体与琼脂糖混合的前处理液分离脂蛋白残粒；然后测定未结合的剩余脂蛋白残粒中胆固醇或甘油三酯。适用于各种自动生化分析仪测定。免疫沉淀分离法是利用免疫亲和胶中抗ApoAI抗体与所有HDL和新合成的含ApoAI的CM结合，又利用抗ApoB-100抗体与含有ApoB-100的HDL、LDL、VLDL和CM等结合。这些免疫复合物就滞留沉淀在胶中，而部分小颗粒的CM和VLDL未结合而在溶液中，这些被称为残粒样微粒（Remnant-like Particles,RLP）。用UC、聚丙烯胺脂蛋白电泳、电镜和高低液相（HPLC）等方法鉴定，这剩余RLP确是CM、VLDL的残粒。一般测定RLP中总胆固醇含量，用RLP-C表示。

实验证明，用免疫沉淀分离法分离的脂蛋白的量，能够代表TRL中潜在致AS的脂蛋白，同时RLP也显示具有致AS脂蛋白残粒的生物学特性。如抑制内皮依赖性血管舒张、增强血小板聚集和不经修饰可被巨噬细胞摄取等。这些都可最终导致AS和血栓形成。从人动脉粥样斑块中分离的脂蛋白在结构上与RLP-C相似。

免疫沉淀分离法应用NCCLS的相关文件进行评价。结果表明，此法有较好精密度：批内<5%，批间<8%，总CV<9%；回收率94.3%-97.1%，平均回收率95.7%；检测线性达2.44mmol/L；检测灵敏度0.05mmol/L；干扰试验：TG<15.3mmol/L、Hb<5g/L、LDL-C<7.0mmol/L、HDL-C<3.0mmol/L、胆红素<342umol/L、抗坏血酸<150mmol/L时，对测定RLP-C无显著干扰。60份患者血清，RLP-C法与超速离心法对照，r=0.989，P>0.05，Y=1.022X+0.021，两者相关良好。

三、脂蛋白残粒测定临床意义

免疫沉淀分离法测定RLP-C的方法简便、快速、准确和精密度好，适用于各种类型自动分析仪，为脂蛋白残粒的研究提供了可靠的手段。RLP-C临床研究日趋重视和深入，大量临床资料表明RLP-C浓度在AS疾病中显著增加。

1、参考值

n=200，RLP-C为X±S=0.195±0.020mmol/L有显著年龄和性别差异。55岁以下同年龄组男女参考值具有显著区别，55岁以上同年龄组男女参考值无显著区别。男性参考值各年龄组无显著区别，而女性各年龄组有显著区别。

2、冠心病患者RLP-C显著升高

冠心病（CAD）患者91例，其中79例实施心血管造影，空腹12h以上采血。RLP-C为X±S=0.71±0.34mmol/L，而同时测定的30例体检对照者RLP-C X±S=0.21±0.13mmol/L。CAD患者血清RLP-C浓度显著升高，两者有非常显著区别。

CAD患者按临床病史分为单纯性CAD组、CAD合并高血血压组和CAD合并HBP和糖尿病组。3组间的RLP-C浓度无显著区别，经两两比较RLP-C水平也显著区别。

73例实施心血管造影术CAD患者中，按造影结果可分为严重、完全、中度和无明显狭窄组。其RLP-C浓度无显著区别，唯HDL-C浓度与年龄和狭窄程度高度相关。

91例CAD患者中，TG≥1.7mmol/L为高TG组，RLP-C为0.80±0.33mmol/L。与TG≤1.69mmol/L为低TG组，RLP-C为0.56±0.31mmol/L。高TG组CAD患者RLP-C显著升高；如将TC按5.7mmol/L也分高低组，则血清RLP-C浓度无明显区别。说明RLP-C水平与TC浓度不相关，RLP-C是代表CM、VLDL代谢的脂质残粒水平，是一个独立的血脂指标。不但用于CAD的危险因素指标，且对于预测未来CAD的发生是一项独立危险因素。

3、II-型糖尿病患者RLP-C浓度为0.43±0.27mmol/L，与正常对照组有显著区别。说明II-型糖尿病患者RLP-C升高，常常伴有TG、TC、LDL-C、ApoB-100及ApoE的升高。在TC正常的DM患者中，RLP-C升高为正常对照组四倍。提示这些病人AS危险增加，有微量白蛋白尿的DM患者RLP-C浓度更高。

4、血液或腹膜透析终末期肾病（ESRD）患者，RLP-C浓度0.63±0.36mmol/L，比对照组有明显升高，且随着透析时间延长RLP-C有逐渐上升的趋势。这一组患者中TG、ApoE、Lp(a)都比对照组显著升高，而HDL-C显著降低

5、III型高脂蛋白血症，血清RLP-C显著升高。因为RLP包含较多ApoE和胆固醇酯。RLP-C/TG比值在III型高脂蛋白血症中有较大的临床意义。实验显示：29例III型高脂蛋白的患者比值为0.16±0.06，而42例高TG血症，但无高脂蛋白血症的患者比值是0.06±0.02，差别有显著意义。若RLP-C/TG≥0.23，则提示III型高脂蛋白血症。因此，检测RLP-C用于诊断III型高脂蛋白血症的阳性率高，且简便快速。

综上所述，免疫沉淀分离法采用单克隆ApoAI、ApoB制备免疫亲和胶，然后测定残余的RLP-C。方法简单，适用于自动生化分析仪，结果准确，有较好的精密度，与超速离心法测定结果高度相关，有可比性，故非常适合临床实验室常规检验。血清RLP-C浓度的升高，说明了小颗粒的CM和VLDL的增高是致AS的脂蛋白。因此，RLP-C水平可独立作为CAD的危险因素，尤其在正常血清脂类水平的人群中可预测CAD的发生。在流行病学调查中有较大的价值。同时在II-型糖尿病、终末期肾病，尤其连续血液或腹膜透析病人、III型高脂蛋白血症病人中，RLP-C水平都显著升高。提示脂蛋白残粒可作为新的致AS的脂质指标。RLP-C项目的开展将拓展临床研究领域或流行病学调查的进一步深入。

公司备有有关RLP-C的文献资料，对本项目感兴趣、希望作进一步探索研究的主任和医院，我们可进一步讨论探讨。

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